抗體的選擇和保存指南

                       抗體(ti) 的選擇和保存指南         
  當我們(men) 要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時候，如何選擇適合我們(men) 實驗需要的

抗體(ti) ，並恰當保存使用，是每個(ge) 科研人員需要細心考慮的。抗體(ti) 種類繁多，品牌眾(zhong)

多，技術參數不一，價(jia) 格和質量更是相差甚大，如何購買(mai) 到高質量價(jia) 格合適的抗體(ti)

，並準確地做出我們(men) 想要的結果，其中有很多細節需要注意。 
一、怎樣選擇適合你實驗需要的抗體(ti)  

1、一抗選擇要點 
（1）確定抗體(ti) 的名字，注意中英文名字、它名、亞(ya) 型等信息。 
（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體(ti) 的說明書(shu) 都

會(hui) 列出該抗體(ti) 經驗證過適用於(yu) 何種實驗的類型，如果抗體(ti) 說明書(shu) 沒有提及的應用類

型，並不意味著該抗體(ti) 不適用於(yu) 此種分析應用類型，而僅(jin) 是說明尚未經過此種實驗

驗證，請根據說明書(shu) 列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體(ti) 。 
（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體(ti) 說明書(shu) 都列出該抗

體(ti) 經試驗驗證過適用於(yu) 何種物種實驗，請根據說明書(shu) 列出已驗證的種屬來選擇適合

你實驗的抗體(ti) 。 
（4）樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助於(yu) 選擇zui合適的抗體(ti) ，

待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會(hui) 變性，蛋白空間構象的改

變，會(hui) 影響抗體(ti) 的免疫親(qin) 和反應。
（5）單多克隆抗體(ti) 的選擇。市麵上的抗體(ti) 還是以多克隆抗體(ti) 為(wei) 主，一般單克隆抗

體(ti) 特異性強，但親(qin) 和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體(ti) 特異性稍

弱，但抗體(ti) 的親(qin) 和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免

）。
2、二抗選擇要點 :
（1）種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決(jue) 定購買(mai) 二抗來源，如一抗是小鼠來源

，那二抗就買(mai) 抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。 
（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇

Biotin標記的二抗，以與(yu) 後麵的SP結合反應，而免疫熒光染色就需要購買(mai) 不同熒光

素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
 二、抗體(ti) 的穩定性 
1. 抗體(ti) 的穩定性是自然界長期進化的結果。抗體(ti) 是免疫係統中zui重要的分子之一

，其穩定性是自然進化篩選的結果。在眾(zhong) 多物種中，抗體(ti) 分子形成了保守而穩定的

結構。
 2. 抗體(ti) 分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60℃，抗體(ti) 分子都能

維持正確折疊，保持應有的活性。 
3. 抗體(ti) 的純度。采用先進的抗體(ti) 純化技術，確保抗體(ti) 產(chan) 品的高純度，保障其抗體(ti)

產(chan) 品的穩定性。
 4. 抗體(ti) 的濃度。高濃度的抗體(ti) 產(chan) 品可減少容器表麵吸附造成的物質損失，高濃度

的抗體(ti) 穩定性更好，抗體(ti) 產(chan) 品中93%的濃度大於(yu) 0.5mg/ml。
 三、怎樣確定抗體(ti) 購買(mai) 渠道和品牌 
    國外抗體(ti) 品牌的質量一般沒問題，但價(jia) 格較貴，而且很多抗體(ti) 品牌本身不

生產(chan) 抗體(ti) ，隨著網絡技術的越來越普及，我們(men) 自己就可以通過國內(nei) 外的相關(guan) 來

檢索，國外zui大的生物試劑查詢：biocompare，大的生物試劑查詢

：丁香通，來查找我們(men) 所需要的產(chan) 品資料。
 四、怎樣保存已獲得的抗體(ti)  
    抗體(ti) 無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反複凍融，收到抗體(ti) 後請根據實驗

的需要，對抗體(ti) 進行分裝，避免同一管抗體(ti) 反複凍融（反複凍融會(hui) 導致抗體(ti) 空間結

構變性，導致多聚體(ti) 形成，從(cong) 而降低抗體(ti) 的結合能力）。抗體(ti) 保存得當與(yu) 否，直接

決(jue) 定了抗體(ti) 的活性和使用效果，如果抗體(ti) 保存得當，抗體(ti) 活性大部分都可以維持數

年。請謹記，無論何時請按照說明書(shu) 推薦的保存條件正確處理和保存抗體(ti) 。
 1. 收到抗體(ti) 後，請務必在4℃，12000rpm，離心3分鍾，（無論是液體(ti) 還是凍幹粉

狀態），再打開管蓋進行分裝和保存（如果抗體(ti) 體(ti) 積小於(yu) 50ul，請延長離心時間至

5分鍾，以保證全部抗體(ti) 均離心下來）。抗體(ti) 一般使用特製的儲(chu) 存管，隻有在

12000rpm離心3分鍾，才能將附著在管壁或蓋內(nei) 的抗體(ti) 全部離心下來（即使是在

10000rpm離心也會(hui) 離心不*，導致出現抗體(ti) 的量不足的現象）。
 2.（1）對絕大多數抗體(ti) 來說，保存在-20℃就*足夠了，沒有任何證據顯示保

存在-80℃會(hui) 更好。 
（2）分裝可以zui大程度的降低反複凍融對抗體(ti) 活性的損害，同時也降低了由於(yu) 多

次從(cong) 同一管中吸取抗體(ti) 造成的汙染可能性。 
（3）分裝的量以一次實驗用完為(wei) 好，zui少不能少於(yu) 10ul每份。因為(wei) 分裝體(ti) 積越小

，抗體(ti) 的濃度越可能會(hui) 受到蒸發以及管壁吸附的影響。 
（4）複融後的分裝抗體(ti) 如果一次用不完，將剩餘(yu) 母液保存在4℃，避免再凍起來。 

（5）抗體(ti) 工作液應該當天配製當天用完，4℃保存盡量不要超過1天。 
（6）避免將抗體(ti) 保存在自動除霜冰箱中，將抗體(ti) 保存在冰箱裏層，避免溫度

變化造成反複凍融。 
 3.大部分抗體(ti) 收到後4℃短暫保存1~2周對抗體(ti) 活性沒有影響。
 4. 大部分抗體(ti) 的運輸條件：一般的運輸過程需要1~2周的時間，所以是在低溫4℃

的條件下來完成的。 4℃運輸zui主要的目的是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 活性的損害

（如果使用幹冰運輸，那麽(me) 收到時抗體(ti) 是凍起來的，為(wei) 了分裝就需要解凍，這就多

了一次凍融的過程），所以運輸過程中避免幹冰運輸。 關(guan) 於(yu) *

（sodium azide）的使用： 為(wei) 了防止微生物汙染，*經常被加入到抗體(ti) 中

（終濃度0.02% (w/v)）。 
   注：*的去除方式 可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除，IgG的分子量

是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量隻有65Da，使用截留分子量為(wei) 14kDa

的濾膜即可將*從(cong) 抗體(ti) 中去除。v                     抗體(ti) 的選擇和保存指南
  當我們(men) 要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時候，如何選擇適合我們(men) 實驗需要的

抗體(ti) ，並恰當保存使用，是每個(ge) 科研人員需要細心考慮的。抗體(ti) 種類繁多，品牌眾(zhong)

多，技術參數不一，價(jia) 格和質量更是相差甚大，如何購買(mai) 到高質量價(jia) 格合適的抗體(ti)

，並準確地做出我們(men) 想要的結果，其中有很多細節需要注意。 
一、怎樣選擇適合你實驗需要的抗體(ti)  

1、一抗選擇要點 
（1）確定抗體(ti) 的名字，注意中英文名字、它名、亞(ya) 型等信息。 
（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體(ti) 的說明書(shu) 都

會(hui) 列出該抗體(ti) 經驗證過適用於(yu) 何種實驗的類型，如果抗體(ti) 說明書(shu) 沒有提及的應用類

型，並不意味著該抗體(ti) 不適用於(yu) 此種分析應用類型，而僅(jin) 是說明尚未經過此種實驗

驗證，請根據說明書(shu) 列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體(ti) 。 
（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體(ti) 說明書(shu) 都列出該抗

體(ti) 經試驗驗證過適用於(yu) 何種物種實驗，請根據說明書(shu) 列出已驗證的種屬來選擇適合

你實驗的抗體(ti) 。 
（4）樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助於(yu) 選擇zui合適的抗體(ti) ，

待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會(hui) 變性，蛋白空間構象的改

變，會(hui) 影響抗體(ti) 的免疫親(qin) 和反應。
（5）單多克隆抗體(ti) 的選擇。市麵上的抗體(ti) 還是以多克隆抗體(ti) 為(wei) 主，一般單克隆抗

體(ti) 特異性強，但親(qin) 和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體(ti) 特異性稍

弱，但抗體(ti) 的親(qin) 和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免

）。
2、二抗選擇要點 :
（1）種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決(jue) 定購買(mai) 二抗來源，如一抗是小鼠來源

，那二抗就買(mai) 抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。 
（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇

Biotin標記的二抗，以與(yu) 後麵的SP結合反應，而免疫熒光染色就需要購買(mai) 不同熒光

素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
 二、抗體(ti) 的穩定性 
1. 抗體(ti) 的穩定性是自然界長期進化的結果。抗體(ti) 是免疫係統中zui重要的分子之一

，其穩定性是自然進化篩選的結果。在眾(zhong) 多物種中，抗體(ti) 分子形成了保守而穩定的

結構。
 2. 抗體(ti) 分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60℃，抗體(ti) 分子都能

維持正確折疊，保持應有的活性。 
3. 抗體(ti) 的純度。采用先進的抗體(ti) 純化技術，確保抗體(ti) 產(chan) 品的高純度，保障其抗體(ti)

產(chan) 品的穩定性。
 4. 抗體(ti) 的濃度。高濃度的抗體(ti) 產(chan) 品可減少容器表麵吸附造成的物質損失，高濃度

的抗體(ti) 穩定性更好，抗體(ti) 產(chan) 品中93%的濃度大於(yu) 0.5mg/ml。
 三、怎樣確定抗體(ti) 購買(mai) 渠道和品牌 
    國外抗體(ti) 品牌的質量一般沒問題，但價(jia) 格較貴，而且很多抗體(ti) 品牌本身不

生產(chan) 抗體(ti) ，隨著網絡技術的越來越普及，我們(men) 自己就可以通過國內(nei) 外的相關(guan) 來

檢索，國外zui大的生物試劑查詢：biocompare，大的生物試劑查詢

：丁香通，來查找我們(men) 所需要的產(chan) 品資料。
 四、怎樣保存已獲得的抗體(ti)  
    抗體(ti) 無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反複凍融，收到抗體(ti) 後請根據實驗

的需要，對抗體(ti) 進行分裝，避免同一管抗體(ti) 反複凍融（反複凍融會(hui) 導致抗體(ti) 空間結

構變性，導致多聚體(ti) 形成，從(cong) 而降低抗體(ti) 的結合能力）。抗體(ti) 保存得當與(yu) 否，直接

決(jue) 定了抗體(ti) 的活性和使用效果，如果抗體(ti) 保存得當，抗體(ti) 活性大部分都可以維持數

年。請謹記，無論何時請按照說明書(shu) 推薦的保存條件正確處理和保存抗體(ti) 。
 1. 收到抗體(ti) 後，請務必在4℃，12000rpm，離心3分鍾，（無論是液體(ti) 還是凍幹粉

狀態），再打開管蓋進行分裝和保存（如果抗體(ti) 體(ti) 積小於(yu) 50ul，請延長離心時間至

5分鍾，以保證全部抗體(ti) 均離心下來）。抗體(ti) 一般使用特製的儲(chu) 存管，隻有在

12000rpm離心3分鍾，才能將附著在管壁或蓋內(nei) 的抗體(ti) 全部離心下來（即使是在

10000rpm離心也會(hui) 離心不*，導致出現抗體(ti) 的量不足的現象）。
 2.（1）對絕大多數抗體(ti) 來說，保存在-20℃就*足夠了，沒有任何證據顯示保

存在-80℃會(hui) 更好。 
（2）分裝可以zui大程度的降低反複凍融對抗體(ti) 活性的損害，同時也降低了由於(yu) 多

次從(cong) 同一管中吸取抗體(ti) 造成的汙染可能性。 
（3）分裝的量以一次實驗用完為(wei) 好，zui少不能少於(yu) 10ul每份。因為(wei) 分裝體(ti) 積越小

，抗體(ti) 的濃度越可能會(hui) 受到蒸發以及管壁吸附的影響。 
（4）複融後的分裝抗體(ti) 如果一次用不完，將剩餘(yu) 母液保存在4℃，避免再凍起來。 

（5）抗體(ti) 工作液應該當天配製當天用完，4℃保存盡量不要超過1天。 
（6）避免將抗體(ti) 保存在自動除霜冰箱中，將抗體(ti) 保存在冰箱裏層，避免溫度

變化造成反複凍融。 
 3.大部分抗體(ti) 收到後4℃短暫保存1~2周對抗體(ti) 活性沒有影響。
 4. 大部分抗體(ti) 的運輸條件：一般的運輸過程需要1~2周的時間，所以是在低溫4℃

的條件下來完成的。 4℃運輸zui主要的目的是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 活性的損害

（如果使用幹冰運輸，那麽(me) 收到時抗體(ti) 是凍起來的，為(wei) 了分裝就需要解凍，這就多

了一次凍融的過程），所以運輸過程中避免幹冰運輸。 關(guan) 於(yu) *

（sodium azide）的使用： 為(wei) 了防止微生物汙染，*經常被加入到抗體(ti) 中

（終濃度0.02% (w/v)）。 
   注：*的去除方式 可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除，IgG的分子量

是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量隻有65Da，使用截留分子量為(wei) 14kDa

的濾膜即可將*從(cong) 抗體(ti) 中去除。